A presença do sÃtio de ligação de AMP é comum a enzimas que utilizam ATP para ativação de substratos. Empregando-se anticorpos contra a sequência YTSGTTGXPKG, conhecida como sÃtio potencial para ligação de AMP, pode-se identificar um grupo de enzimas pela análise de Western blot. Utilizando-se o peptÃdeo sintético YTSGTTGRPKGC, acoplado à albumina de soro bovino (BSA) foram obtidos anticorpos policlonais em coelhos. Tais anticorpos têm sido empregados com sucesso principalmente na identificação de enzimas da sÃntese peptÃdica não ribossomal (peptÃdeo sintetases). Este trabalho mostra a utilização de anti-soro contra a sequência YTSGTTGRPKGC na identificação de uma provável peptÃdeo sintetase em Metarhizium anizopliae, um fungo empregado no controle biológico de insetos.
An AMP binding site is common to enzymes employing ATP to activate substrates. Using antibodies against the core: YTSGTTGXPKG (known as the putative adenylating domain signature) it is possible to identify a group of enzymes by Western blotting. Employing the synthetic peptide: YTSGTTGRPKGC, coupled to bovine serum albumin (BSA), we have obtained polyclonal antibodies in rabbits. This antiserum has been used with success mainly on identification of peptide synthetases (enzymes enrolled on the non-ribossomal peptide biosynthesis). The present work shows the application the anti-YTSGTTGRPKGC antibodies to identify a putative peptide synthetase in cell-free extracts of Metarhizium anizopliae, a fungus commonly used biological control.
