O biodiesel representa uma alternativa renovável, sustentável e ambientalmente segura aos combustíveis fósseis. A produção industrial de biodiesel, contudo, leva a obtenção de grandes quantidades de glicerol como um subproduto, portanto, buscam-se novas aplicações para este resíduo. O uso de leveduras oleaginosas vem sendo estudado por serem promissoras fonte de lipídeos para produção de biodiesel, têm alta taxa de crescimento, podendo assimilar diversas fontes de carbono, como o glicerol bruto. O estudo investigou a capacidade de isolados inéditos de Yarrowia lipolytica para acumular lipídios, utilizando glicerol bruto como única fonte de carbono. Dez isolados coletados de Laticínios da Bacia do Agreste-PE, identificadas por MALDI-TOF como Y. lipolytica, foram cultivados e determinada a cinética de crescimento. Para todas as linhagens, o máximo crescimento celular foi atingido em 28 horas. A produção de lipídeos totais foi em média 25 ± 6,3 mg.g‑1, no entanto a maior produção foi obtida pela linhagem Y. lipolytica CTN‑0008 (37,73 mg.g-1). Os resultados comprovaram que os novos isolados de Y. lipolytica, no Agreste de Pernambuco, têm a capacidade de acumular lipídios empregando como única fonte de carbono glicerol bruto, indicando a linhagem CTN-0008 como promissora em relação às outras linhagens, e sugerindo sua utilização para otimização de condições de produção de lipídeos totais a partir do glicerol bruto para fins de produção de biodiesel.