Para validar uma técnica prática de avaliação
simultânea das membranas plasmática, acrossomal
e mitocondrial em espermatozóides eqüinos três
sondas fluorescentes (PI, FITC-PSA e MITO)
foram associadas. Quatro ejaculados de três
garanhões (n=12) foram diluÃdos em meio TALP e
divididos em duas alÃquotas, uma alÃquota foi Braz. Arch. Biol. Technol. v.53 n. 6: pp. 1285-1292, Nov/Dec 2010
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submetida a flash frozen em nitrogênio lÃquido
para induzir danos nas membranas celulares. Três
tratamentos foram preparados com as seguintes
proporções de sêmen fresco: sêmen flash frozen:
100:0 (T100), 50:50 (T50), e 0:100 (T0). Uma
amostra de 150 μL de sêmen diluÃdo de cada
tratamento foi adicionada de 2 μL de PI, 2 μL de
MITO e 80 μL de FITC-PSA; incubadas Ã
38,5oC/8 min, e as células espermáticas foram
avaliadas por microscopia de epifluorescência.
Baseados na análise de regressão esta é uma
técnica eficiente e prática para determinar danos
em espermatozóides eqüinos, capaz de determinar
a porcentagem de espermatozóides mais
representativa do potencial fertilizante do ovócito.
To validate a practical technique of simultaneous evaluation of the plasma, acrosomal and mitochondrial
membranes in equine spermatozoa three fluorescent probes (PI, FITC-PSA and MITO) were associated. Four
ejaculates from three stallions (n=12) were diluted in TALP medium and split into 2 aliquots, 1 aliquot was flash
frozen in liquid nitrogen to induce damage in cellular membranes. Three treatments were prepared with the
following fixed ratios of fresh semen: flash frozen semen: 100:0 (T100), 50:50 (T50), and 0:100 (T0). A 150-μL
aliquot of diluted semen of each treatment was added of 2 μL of PI, 2 μL of MITO and 80 μL of FITC-PSA;
incubated at 38.5oC/8 min, and sperm cells were evaluated by epifluorescent microscopy. Based in regression
analysis, this could be an efficient and practical technique to assess damage in equine spermatozoa, as it was able
to determine the sperm percentage more representative of the potential to fertilize the oocyte.
