Flow Cytometry Protocol to Evaluate Ionizing Radiation Effects on P-Glycoprotein Activity

Ano: 2009 | Volume: 52 | Número: 2

Autores: Neyliane Gonçalves dos Santos, Ademir Amaral, Mariana Brayner Cavalcanti, Maria Amélia Batista Neves, Cíntia Gonsalves de Faria Machado

Palavras-chave: combined therapy, radiation effect, p-glycoprotein, multidrug resistance, functional analysis, flow cytometry

Resumo Português:

O objetivo deste trabalho foi estabelecer um
protocolo para avaliar o efeito da radiação
ionizante na atividade da glicoproteína-P (gp-P).
Para isto, amostras de sangue periférico humano
foram irradiadas in vitro com diferentes doses, e a
atividade da gp-P foi analisada para os linfócitos T
CD4 e CD8 através do ensaio do efluxo da
rodamina123 por citometria de fluxo. Por emprego
simultâneo dos parâmetros de porcentagem e
índice médio de fluorescência, a análise indivíduo
por indivíduo apontou mudanças na atividade da
gp-P para alguns indivíduos e amostras irradiadas.
Com base neste trabalho, o protocolo proposto foi
considerado adequado para avaliar a atividade da
gp-P em células após estresse radioativo. Além
disso, esta pesquisa sugere que a atividade da gp-P
poderia ser um importante fator para definir
protocolos paciente-específicos envolvendo
quimio e radioterapia, particularmente quando a
exposição à radiação precede o tratamento
químico.

Resumo Inglês:

The aim of this work was to establish a protocol to evaluate ionizing radiation effects on P-glycoprotein (P-gp)
activity. For this, human peripheral blood samples were irradiated in vitro with different doses and P-gp activity
was analyzed for CD4 and CD8 T lymphocytes through rhodamine123-efflux assay by flow cytometry. By
simultaneous employment of percentage and mean fluorescence index parameters, subject-by-subject analysis
pointed out changes in P-gp activity for some individuals and irradiated samples. Based on this work, the proposed
protocol was considered adequate for evaluating P-gp activity on cells after radioactive stress. Besides, this
research suggests that P-gp activity could be an important factor to define patient-specific protocols in combined
chemo- and radiotherapy, particularly when radiation exposure precedes chemical treatment.