Marcadores de RAPD foram utilizados para
investigar a distribuição da variabilidade genética
de linhagens de Guignardia citricarpa, G.
mangiferae, e Phyllosticta spinarum isolados em
diversos hospedeiros no Brasil, Argentina,
México, Costa Rica, Tailândia, Japão, EUA e
Ãfrica do Sul. O fungo Guignardia citricarpa Kiely
(Phyllosticta citricarpa McAlp Van Der Aa) é o
agente causal da Mancha Preta dos Citros (CBS),
uma doença que afeta diversas plantas cÃtricas,
causando dano a aparência dos frutos,
prejudicando a exportação. Diversos estudos têm
demonstrado a existência de uma espécie
endofÃtica muito semelhante morfologicamente a
G. citricarpa, e que permanece de forma endofÃtica
no mesmo hospedeiro. Dificultando assim, a
identificação de plantas e frutos livres do agente
causa da CBS. A análise do perfil de RAPD
revelou uma clara discriminação entre isolados
patogênicos de G. citricarpa e isolados endofÃticos
(G. mangiferae e P. spinarum). A Análise de
Coordenadas Principais (PCO) baseada na matriz
de similaridade genética dos marcadores RAPD,
demonstrou a formação de quatro grupos, sem
relação com origem geográfica ou com
hospedeiros utilizados. A análise de Variância de
Marcadores Moleculares (AMOVA) indicou que
62,8% da variação genética é encontrada entre as
populações (G. citricarpa, G. mangiferae, P.
spinarum and Phyllosticta sp.). Entretanto, variação substancial foi encontrada dentro destas
populações (37,2%). Bandas de RAPD exclusivas
de isolados de G. citricarpa foram clonadas,
sequenciadas e utilizadas na obtenção de SCARS
(Sequence Characterized Amplified Regions), que
permitiram o desenvolvimento de novos primers
especÃficos para a identificação de G. citricarpa.
Reações de PCR (Polymerase Chain Reaction)
utilizando este par de primers corroboraram os
agrupamentos obtidos pelos marcadores de RAPD,
revelando sua eficiência na identificação do agente
causal da CBS.
RAPD markers were used to investigate the distribution of genetic variability among a group of Guignardia
citricarpa, G. mangiferae, and Phyllosticta spinarum isolates obtained from several hosts in Brazil, Argentina,
Mexico, Costa Rica, Thailand, Japan, United States and South Africa. Pathogenic isolates G. citricarpa Kiely
(anamorph form P. citricarpa McAlp Van Der Aa) are the etiological agent of the Citrus Black Spot (CBS), a disease
that affects several citric plants and causes substantial injuries to the appearance of their fruits, thus preventing
their export. Several previous studies have demonstrated the existence of an endophytic species with high
morphological similarity to the causal agent of CBS that could remain latent in the same hosts. Consequently, the
identification of the plants and fruits free from the causal agent of the disease is severely hampered. The RAPD
analysis showed a clear discrimination among the pathogenic isolates of G. citricarpa and endophytic isolates (G.
mangiferae and P. spinarum). In addition, a Principal Coordinate Analysis (PCO) based on a matrix of genetic
similarity estimated by the RAPD markers showed four clusters, irrespective of their host or geographical origin. An
Analysis of Molecular Variance (AMOVA) indicated that 62.8% of the genetic variation was found between the
populations (G. citricarpa, G. mangiferae, P. spinarum and Phyllosticta sp.). Substantial variation was found in the
populations (37.2%). Exclusive RAPD markers of isolates of G. citricarpa were cloned, sequenced and used to
obtain SCARS (Sequence Characterized Amplified Regions), which allowed the development of new specific primers
for the identification of G. citricarpa PCR (Polymerase Chain Reaction) analysis using a pair of primers specific to
pathogenic isolates corroborating the groupings obtained by the RAPD markers, underscoring its efficiency in the
identification of the causal agent of CBS.
