Os estudos que visam desenvolver avaliações ecotoxicológicas devem realizar os ensaios, necessariamente, em um mesmo valor de pH. Ensaios para serem confiáveis devem ser realizados em meio de cultura com valores de pH idênticos, mesmo após adição do agente estressor. Este trabalho visou desenvolver uma técnica de ensaios ecotoxicológicos usando sementes como organismos teste, em meio de cultura empregando um gel como camada suporte. A preparação do gel desenvolveu-se por meio de uma Ãgua de Diluição contendo concentrações otimizadas de nutrientes cujo valor de pH foi predefinido e fixado por solução tampão contendo parte dos nutrientes desejados. Para avaliações ecotoxicológicas foram adicionadas concentrações de agente estressor na preparação das Ãguas de Diluição (uma para cada concentração de estressor), acrescentando-se AGAR (17 g L-1) e aquecendo-se a 85°C para completa dissolução. Volumes da solução, ainda quente (20 mL), foram colocados em recipientes de vidro (250 mL) deixando esfriar até temperatura ambiente para formar uma camada de gel firme. Sobre o gel foram adicionadas 50 sementes lacrando-se o recipiente e colocando-o em local com luz ambiente (sem incidência direta da luz solar). A metodologia apresentou-se de simples operação, não requerendo manipulações no perÃodo de desenvolvimento dos embriões. Apresentou custo muito baixo (U$ 0,04), permitindo realizar avaliações eficazes dos ensaios ecotoxicológicos com análises seguras da germinação das sementes e estruturas essenciais das plântulas em valores de pH idênticos.
Tests in studies aimed at developing ecotoxicological assessments should necessarily be conducted at the same pH value. In order for trials to be trusted, they should be performed in culture medium with identical pH values, even after addition of the stressors. This work aimed to develop a technique of ecotoxicological tests using seeds as test organisms in culture medium using gel as a support layer. The gel preparation was developed by a Dilution Water containing optimal concentrations of nutrients whose pH value had been preset and fixed by a buffer solution containing part of the desired nutrients. For ecotoxicological assessments, we added stressor concentrations in the preparation of dilution water (one for each concentration of the stressor) and we added also Agar (17 g L-1) and heated at 85 °C for complete dissolution. Volumes of solution (20 mL), still hot, were placed in glass containers (250 mL) and allowed to cool to room temperature to form a firm gel layer. About 50 seeds were placed on the top of the gel layer and the container was sealed and placed in a location with ambient light (no direct sunlight). The methodology involves simple techniques and does not require manipulation during embryo development, allowing for effective assessment of ecotoxicological tests with secure analysis of seed germination and development of the essential structures of seedlings with equal pH values, and has very low analytical cost (US $ 0.04).
Los estudios dirigidos al desarrollo de evaluaciones ecotoxicológicas deben llevar a cabo los testes necesariamente en el mismo valor de pH. Ensayos para ser confiable deben ser realizado en medio de cultivo con valores de pH iguales, incluso después de la adición de los agentes estresores. Este trabajo tuvo como objetivo desarrollar una técnica de ensayos ecotoxicológicos utilizando semillas como organismos testes en medio de cultivo usando gel como camada soporte. La preparación del gel fue desarrollado por una Agua de Dilución que contenÃa concentraciones optimizadas de nutrientes cuyo valor de pH se ha preseleccionado y fijado por una solución tampón que contenÃa parte de los nutrientes deseados. Para las evaluaciones ecotoxicológicos fueran añadidas concentraciones del agente estresor en la preparación de la Agua de Dilución (una para cada concentración del agente estresor), se añadieron AGAR (17 g L-1) calentándose a 85°C para la disolución completa. Volúmenes de la solución, todavÃa caliente (20 mL), se colocaron en recipientes de vidrio (250 mL) dejándola enfriar hasta temperatura ambiente para formar una camada de gel firme. Cerca de 50 semillas se añadieron en la camada de gel cerrando herméticamente el recipiente y colocándolo en un lugar con luz ambiente (sin incidencia directa de la luz solar). La metodologÃa se presentó como una técnica de operación sencilla que no requiere manipulaciones durante el desarrollo de los embriones, lo que permite a costo analÃtico muy bajo (0,04 dólares EE.UU.), evaluaciones eficaces de los ensayos ecotoxicológicos con análisis seguras de la germinación de semillas y desarrollo de las estructuras esenciales de las plántulas con los valores de pH idénticos.
