Padronização de uma técnica de congelamento de sêmen em cães

Ano: 2009 | Volume: 37 | Número: 3

Autores: Mariana Machado Neves, Marc Henry, Carlos Augusto Alanis Clemente, Luiz Guilherme Dias Heneine

Palavras-chave: sêmen canino, congelamento, meio diluidor, temperatura de descongelamento

Resumo Português:

Várias pesquisas têm sido desenvolvidas com o intuito de melhorar a técnica da criopreservação de sêmen em cães.
O objetivo deste trabalho foi estabelecer o meio diluidor de congelamento do sêmen canino mais adequado para um protocolo
de congelamento realizado em máquina computadorizada, além de otimizar a temperatura de descongelamento. Foram usados
cinco cães e coletados três ejaculados/animal. Foram testados os meios Tris-cítrico (G1), Lactose-gema (G2) e INRA 82 (G3)
com 5% de glicerol. Alíquotas de sêmen foram diluídas em cada meio e foram congeladas em máquina computadorizada
programada para realizar uma curva de resfriamento de -0,5ºC/min, de 25-29ºC até 5ºC, período de equilíbrio de 1h a 5ºC,
seguida da curva de congelamento de -20ºC/min, de 5ºC até -120ºC. Foram testadas duas temperaturas de descongelamento:
A) 37ºC/30s e B) 52ºC/10s, seguida de 37ºC/30s. Os espermatozóides foram avaliados quanto à motilidade progressiva,
morfologia, reatividade ao teste hiposmótico e integridade de membranas avaliadas pelo uso de fluorescência (CFDA/IP). Os
meios de congelamento Tris-cítrico e Lactose-gema foram superiores ao meio INRA quanto aos parâmetros de motilidade e
morfologia espermática (p<0,05). Não houve diferença entre eles quanto à manutenção da integridade funcional e estrutural
das membranas espermáticas (p>0,05). O descongelamento a 52ºC resultou no aparecimento de maior porcentagem de anormalidades
acrossomais que o descongelamento a 37ºC (p<0,05). Com base nos resultados, pode-se concluir que os meios Triscítrico
e Lactose-gema preservaram melhor a viabilidade espermática após o descongelamento a 37ºC/30s na curva de
resfriamento de -0,5ºC/min e de congelamento de -20ºC/min.

Resumo Inglês:

Many researches have been developed to improve the canine semen cryopreservation technique. The aims of the
present work were to determine the freezing extenders adequacy to freeze canine semen using a computadorized system. Two
thaw temperature was evaluated as well. Five dogs were used and three ejaculates/animal were collected. The extenders tested
were Tris-citric-yolk (G1), lactose-yolk (G2) and INRA 82 (G3), with 5% glycerol. A computadorized freezing system was used
and cooling rate was -0,5ºC/min, from 25-29ºC to 5ºC, the equilibration period was at 5ºC/1h followed by freezing the samples
at a rate of -20ºC/min, from 5ºC to -120ºC. Thawing temperatures were: A) 37ºC/30s and B) 52ºC/10s followed by 37ºC/30s.
Evaluation post thaw attributes were spermatic motility and morphology, HOST and sperm membrane integrity by a fluorescence
test using CFDA/PI. Motility and sperm morphology were better preserved with the extenders Tris-citric yolk and lactose-yolk
than with INRA 82 (p<0.05). No difference was observed among treatments as for CFDA/PI and HOST (p>0.05) evaluations.
Thawed temperature of 52ºC provoked more acrosome abnormality than when 37ºC was used (p<0.05). In conclusions, Triscitric
and Lactose-yolk were more efficient than INRA 82 to preserve the spermatozoa viability post-thaw and thawing at
37ºC/30s showed to be more suitable when the cooling and freezing curve were -0,5ºC/min -20ºC/min, respectively.