PRODUÇÃO DE ANTÍGENO SOMÁTICO DE Haemonchus contortus ADULTOS E SEU USO EM ENSAIO IMUNOENZIMÁTICO INDIRETO PARA DETECÇÃO DE IMUNOGLOBULINA G OVINA
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PRODUÇÃO DE ANTÍGENO SOMÁTICO DE Haemonchus contortus ADULTOS E SEU USO EM ENSAIO IMUNOENZIMÁTICO INDIRETO PARA DETECÇÃO DE IMUNOGLOBULINA G OVINA
Autor Correspondente: ROSALINSKI-MORAES F | [email protected]
Palavras-chave: igg, haemonchus contortus, elisa
Resumos Cadastrados
Resumo Português:
Um dos fatores limitantes à criação de pequenos ruminantes é a verminose
gastrintestinal, sobretudo em regiões de clima ameno, onde o Haemonchus contortus é o
parasita mais prevalente. Para compreender a resposta imune do ovino a este parasita e
identificar os animais mais responsivos, é necessária a adoção de metodologias
adequadas para mensurar a resposta imune do hospedeiro. O presente trabalho foi
desenvolvido com o objetivo de produzir um antÃgeno somático de H. contortus e utilizá-lo
em técnicas de ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) para detecção de IgG ovina.
Para a obtenção do antÃgeno, cerca de 1000 helmintos adultos (machos e fêmeas) foram
lavados, submetidos à maceração, ciclos de congelamento e descongelamento,
sonicação e centrifugação. Foram utilizados como soros controle-positivo 20 amostras
oriundas de ovelhas adultas submetidas à infecção natural. Como controle-negativos,
foram utilizadas amostras pré-colostrais de 15 cordeiros, bem como de dois borregos
mantidos livres de parasitas. Foram testadas várias diluições de antÃgeno, soros e um
conjugado comercial anti-IgG ovina a fim de obter as concentrações ideais. A
concentração ótima de antÃgeno foi de 5 μg.mL-1, e as diluições de soro e de conjugado
que permitiram melhor discriminação entre positivos e negativos foram, respectivamente,
1:80 e 1:1000.
Resumo Inglês:
One of the most limiting factors to the small ruminant husbandry is gastrointestinal
verminosis, especially in mild whether regions, where Haemonchus contortus is the
predominant worm. To understand sheep immune response to this parasite and to identify
the more responsive animals, it is necessary to adopt adequate methods that can measure
the host’s immune response. This work was conducted in order to produce a somatic
extract of H.contortus and to employ it in an indirect enzyme-linked Immunosorbent assay
(ELISA) to detect ovine IgG. For obtaining the antigen, about 1.000 adult worms (both
male and female) were washed, macerated, submitted to freezing and thawing cycles,
sonicated and centrifuged. Samples from 20 ewes naturally infected were used as positive
standards. Negative standards were 15 pre-colostral samples and those from two lambs kept indoors and parasite-free. It was tested several dilutions of antigen, sera and antisheep
IgG commercial conjugated in order to obtain the optimal condition. The optimal
antigen concentration was 5 μg.mL-1 and the optimal dilutions of sera and conjugated were
1:80 and 1:1000, respectively.