Production and Regeneration of Protoplasts from Orchid Mycorrhizal Fungi Epulorhiza repens and Ceratorhiza sp

Ano: 2010 | Volume: 53 | Número: 1

Autores: Irene da Silva Coelho, Marisa Vieira de Queiroz, Maurício Dutra Costa, Maria Catarina Megumi Kasuya, Elza Fernandes de Araújo

Palavras-chave: ceratorhiza, epulorhiza, molecular biology, protoplast, regeneration

Resumo Português:

O objetivo deste trabalho foi padronizar as
condições de obtenção e regeneração de
protoplastos de Epulorhiza repens e Ceratorhiza
sp. Para o fungo E. repens, a maior produção de
protoplastos, 8.0 x 106 protoplastos/mL, foi obtida
em KCl 0.6 M, na presença de 15 mg/mL de
“Lysing Enzymes” e micélio fúngico com 2 dias
de idade. A maior freqüência de regeneração
obtida foi de 8,5 % quando sacarose 0.5 M foi
utilizada como estabilizador osmótico. Do total de
protoplastos obtidos, 80 % eram nucleados e 20 %
anucleados. Para Ceratorhiza sp., a maior
produção de protoplastos, 4,0 x 107
protoplastos/mL, foi obtida em NaCl 0.6 M, na
presença de 15 mg/mL de “Lysing Enzymes” e
15mg/mL de Glucanex, e micélio fúngico com 2
dias de idade. A maior freqüência de regeneração
obtida foi de 6.7 % utilizando sacarose 0.5 M
como estabilizador osmótico. Do total de
protoplastos obtidos, 88.8 % eram nucleados e 1.2
% anucleados. O estabelecimento de protocolo
otimizado para obtenção e regeneração de
protoplastos dos fungos E. repens e Ceratorhiza
sp. é importante, permitindo o estabelecimento de
técnicas de transformação genética, o isolamento
de mutantes, a determinação de cariótipo
eletroforético e o cruzamento de linhagens.

Resumo Inglês:

The aim of this work was to study the standardization of conditions to obtain and regenerate Epulorhiza repens and
Ceratorhiza sp. protoplasts. For E. repens, the largest number of protoplasts (8.0 × 106 protoplasts/mL) was
obtained in 0.6 M KCl, using 15 mg/mL of Lysing Enzymes, and 2-day-old fungal mycelium. When 0.5 M sucrose
was used as osmotic stabilizer, the highest frequency of regeneration was achieved (8.5 %); 80.0 % of protoplasts
were nucleated, and 20.0 % anucleated. For Ceratorhiza sp., the largest number of protoplasts (4.0 × 107
protoplasts/mL) was achieved in 0.6 M NaCl, when 15 mg/mL of Lysing Enzymes and 15mg/mL of Glucanex, with 2-
day-old fungal mycelium were used. The highest frequency of regeneration was 6.7 % using 0.5 M sucrose as
osmotic stabilizer; 88.8 % of protoplasts were nucleated, and 11.2 % anucleated.