O vírus do ectima contagioso (ECV), também conhecido como orf vírus (ORFV), é o agente etiológico do ectima contagioso (EC) dos ovinos e caprinos, e pertence ao gênero Parapoxvírus, da família Poxviridae. Em certos casos, o EC pode ser confundido com enfermidades vesiculares, havendo assim, a necessidade de sua diferenciação, sobretudo porque, segundo as normas do Programa Nacional de Erradicação da Febre Aftosa (PNEFA), os caprinos e ovinos não são vacinados contra a Febre Aftosa (FA), atuando como animais sentinelas. Embora estudos iniciais tenham demonstrado a utilidade da reação em cadeia de polimerase (PCR) como teste diagnóstico, ainda não há estudos sobre sua utilização envolvendo amostras de campo brasileiras, que podem ser geneticamente diferentes das já estudadas. Este trabalho foi conduzido com o objetivo de padronizar uma PCR em tempo real (qPCR) utilizando o corante SYBR Green I para diagnóstico molecular de EC diretamente a partir de DNA extraído de lesões do animal afetado ou de cultivo celular inoculado com amostras de campo. Os produtos da qPCR foram detectados com a análise da curva de dissociação que mostrou um pico a 88 ºC, indicativo de que as amostras positivas têm apenas um produto de amplificação específico. Todas as amostras de DNA testadas (crostas de 29 animais e seus respectivos cultivos celulares) foram positivas na qPCR. A qPCR foi capaz de detectar o DNA até, no mínimo, a diluição de 10.000 vezes, correspondendo a 0,056 ng do DNA. Acredita-se que com as adicionais validações a qPCR relatada neste trabalho poderá ser empregada para o diagnóstico diferencial nas ações de vigilância sanitária do PNEFA.
The virus of contagious ecthyma (CEV), also known as orf virus (ORFV) is the etiological agent of contagious ecthyma (CE) in sheep and goat and belongs to the Parapoxvirus genus, family Poxviridae. In some cases, CE can be confused with vesicular diseases so there is need for differentiation especially because, according to the standards of the National Program for the Eradication of FMD (PNEFA), goats and sheep are not vaccinated against Foot and Mouth Disease (FMD), acting as sentinel animals. Although initial studies have demonstrated the usefulness of the polymerase chain reaction (PCR) as a diagnostic test, there are no studies involving its use on Brazilian field samples, which may be genetically distinct from previously studied samples, as described in a study of restriction sites analysis of Brazilian CE samples. This work was conducted with the goal of standardizing a PCR (qPCR) test using SYBR Green I dye for molecular diagnosis of EC in DNA extracted from lesions of affected animal or cell culture inoculated in field samples. The products were detected with qPCR dissociation curve analysis which showed a peak at 88 ºC indicating that positive samples have only one specific amplification product. All DNA samples tested (29 animals crusts and their cell cultures) were positive in the qPCR. The qPCR was able to detect the DNA of at least 10,000 times dilution corresponding to 0.056 ng of DNA. It is believed that with the additional qPCR validations reported in this study, it can be used for differential diagnosis in the health surveillance of PNEFA.
