Características do crescimento e dinâmica da síntese de proteínas em cultura de calos de Glycine wightii (Wight & Arn.) Verdc.

Ano: 2005 | Volume: 29 | Número: 6

Autores: A. L. C. da Silva, C. S. Caruso, R. de A. Moreira, A. C. G. Horta

Palavras-chave: glycine, leguminosae, callogenesis, sds-page

Resumo Português:

Explantes cotiledonários foram primeiramente cultivados em meio MS suplementado com 2,4-D 4,52 mM e cinetina 0,46
mM. O desenvolvimento dos calos foi acompanhado (0, 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28 até 32 dias após o subcultivo) e uma curva de
crescimento foi determinada com base nos pesos fresco e seco dos calos. A curva de crescimento apresentou um padrão sigmoidal com
quatro fases distintas. A maior porcentagem de crescimento foi observada na fase exponencial e a menor na fase estacionária. Estes
resultados indicam que o subcultivo dos calos pode ser realizado 20 dias após a inoculação. Os calos obtidos após um período de 28
dias foram liofilizados, macerados e submetidos à extração de proteínas solúveis, utilizando tampões com diferentes valores de pH
(2,6; 4,0; 6,0; 8,0 e 10,0) e o teor protéico dos extratos foi determinado pelo método de Bradford. O tampão pH 8,0 foi o mais eficiente
na extração de proteínas solúveis dos calos. A análise de aminoácidos mostrou que os calos apresentam um alto teor de ácido aspártico/
asparaina em um baixo teor de metionina. A dinâmica da síntese de proteínas nos calos foi acompanhada por ensaios eletroforéticos
(SDS-PAGE).

Resumo Inglês:

Cotyledon explants were first cultured on MS medium supplemented with 4.52 M 2,4-D and 0.46 mM kinetin. The
development of the calli was followed (0, 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28 and 32 days after) and the growth curve was determined, based in
fresh and dry weight. The growth curve presented sigmoidal form with four distinct phases. The highest growth percentage was
observed at the exponential phase and the lowest at the stationary phase. These results indicated that cotyledon callus subculture
should be performed 20 days after inoculation. The calli obtained after a period of 28 days were freeze dried, macerated and submitted
to extraction with buffers of different pH values (2.6; 4.0; 6.0; 8.0 and 10.0) and the proteins in the extracts were determined by
Bradford method. The pH 8.0 buffer was the most efficient to extract the largest amount of protein. The amino acid analyses calli
showed a high content of aspartic acid and low content of metionin. The dynamics of protein synthesis in calli was followed by SDSPAGE
electrophoresis.