VARIABILIDADE GENÉTICA NA REGIÃO ITS DO rDNA DE ISOLADOS

Ano: 2010 | Volume: 34 | Número: 1

Autores: Josiane Pacheco Menezes, Manoeli Lupatini, Zaida Inês Antoniolli, Elena Blume, Emanuele Junges, Clarice G. Manzoni

Palavras-chave: fungos de solo, caracterização molecular, sequências, endonucleases, análises de dna

Resumo Português:

A análise de características morfológicas e culturais podem não ser suficientes para uma caracterização precisa das
espécies de Trichoderma e Fusarium. Objetivou-se, neste trabalho, caracterizar a região do Espaço Interno Transcrito (ITS)
do rDNA dos isolados UFSMT15.1, UFSMT16 e UFSMT17 de Trichoderma spp. utilizados no biocontrole de Fusarium
oxysporum f. sp. chrysanthemi (isolado) UFSMF6. A extração de DNA de cada isolado foi realizada a partir de micélio
produzido em meio líquido Batata-Dextrose. As amostras de DNA genômico foram submetidas à Reação em Cadeia da
Polimerase (PCR) com os oligonucleotídeos iniciadores universais ITS1 e ITS4 e o produto gerado foi sequenciado. Os
fragmentos gerados pela amplificação da PCR foram tratados com as enzimas de restrição HaeIII, HinfI e MboI. As regiões
ITS1, ITS2 e 5.8S do rDNAdesses isolados fúngicos foram amplificadas com sucesso.Aregião ITS dos isolados UFSMT15.1,
UFSMT16 e UFSMT17 de Trichoderma e o isolado UFSMF6 de Fusarium apresentaram uma banda simples com um
fragmento de aproximadamente 600 pares de base (pb). As enzimas de restrição HaeIII, HinfI e MboI geraram polimorfismo
de bandas entre os isolados. Com base nas análises da sequência de DNA, os isolados UFSMT15.1, UFSMT16, UFSMT17
e UFSMF6 apresentaram maior similaridade com as espécies Trichoderma koningiopsis, Hypocrea virens, Hypocrea lixii e
Fusarium oxysporum, respectivamente.

Resumo Inglês:

The analysis of morphological and cultural characteristics may not enough for the characterization of the species of
Trichoderma and Fusarium. The aim of this work was to characterize the Internal Transcribed Spacer (ITS) region of the rDNA
of UFSMT15.1, UFSMT16 and UFSMT17 isolates of Trichoderma spp. used in the biocontrol of Fusarium oxysporum f. sp.
chrysanthemi UFSMF6. DNA extraction of each isolate was accomplished starting from hyphae produced in liquid medium
Potato-Dextrose-Agar. The samples of genomic DNA were submitted to the Polymerase Chain Reaction (PCR) with the primers
ITS1 and ITS4, and the product was sequenced. The fragments generated from PCR amplification were digested with the
restriction enzymes HaeIII, HinfI and MboI. The ITS region of the Trichoderma’s isolates UFSMT15.1, UFSMT16 and UFSMT17
and the Fusarium UFSMF6 isolate showed a simple band with a fragment with 600 base pairs (bp) approximately. The restriction
enzymes HaeIII, HinfI and MboI generated band polymorphism among the isolates. The isolates UFSMT15.1, UFSMT16,
UFSMT17 and UFSMF6 showed high similarity whit Trichoderma koningiopsis, Hypocrea virens, Hypocrea lixii and Fusarium
oxysporum species, respectively.