Cogumelos são fungos macroscópicos e por não possuÃrem clorofila, necessitam absorver nutrientes do ambiente para sobrevivência, utilizando substâncias orgânicas em decomposição para sua nutrição. Alguns cogumelos como o Agaricus blazei tem mostrado seu potencial antimicrobiano frente a bactérias, bolores e algumas doenças, pela ação de compostos bioativos encontrados no micélio e corpo de frutificação. Para um maior aproveitamento destes compostos do basidiocarpo do cogumelo, são necessárias etapas de purificação. Existem muitas formas de purificar um composto, mas as técnicas cromatográficas em geral são preferidas, por sua resolução e recuperação obtidas. Com isso, objetivou-se a extração, purificação por permeação em gel e a análise antimicrobiana do extrato do cogumelo Agaricus blazei, frente ao micro-organismo Staphylococcus aureus. A fim de avaliar a capacidade antimicrobiana do extrato, foram feitas análises de porcentagem de inibição utilizando a metodologia descrita pela NCCLS (2003), as leituras de absorvância dos poços da microplaca com as amostras, foram feitos em leitora de microplacas e após, foram realizados os cálculos de porcentagem de inibição. Os resultados de inibição obtidos foram satisfatórios para 3 frações purificadas do extrato, frente ao micro-organismo estudado, mostrando a eficiência do processo de purificação, visto que a amostra bruta do extrato do cogumelo não apresentou inibição contra o mesmo micro-organismo.